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蛋白质在碱性溶液中其肽键与Cu²⁺螯合，形成蛋白质一铜复合物，此复合物使酚试剂的磷钼酸还原，产生蓝色化合物，在一定条件下，利用蓝色深浅与蛋白质浓度的线性关系作标准曲线并测定样品中蛋白质的浓度。

Lowry法测定较为不受脂类物质干扰，适于脂类含量较高的样品测定，也能耐受相当浓度的去垢剂如SDS。本试剂盒可进行1000次1mL比色杯测定。

1. 1×Buffer A工作液配制：用前将5×Buffer A-1、5×Buffer A-2(如储存温度较低，可能有结晶析出，可37℃水浴加热溶解)用蒸馏水稀释5倍后等体积混合即得1×Buffer A工作液；
   
2. BufferB工作液配制：用前将Buffer B-1与Buffer B-2等体积混合即得BufferB工作液；
   
3. 碱性铜试剂工作液配制：1×Buffer A工作液、BufferB工作液按50：1比例混合，即为碱性铜试剂工作液。该工作液须在24小时内使用，过期失效。
   
4. 蛋白质标准工作液(0.25mg/mL)配制：蛋白质标准溶液(2.5mg/mL BSA)用前用蒸馏水稀释10倍至蛋白质标准工作液(0.25mg/mL)。

1. 还原物质、酚类物质对此反应有干扰。
   
2. 如染料吸附到比色杯上，可用甲醇清洗。

1. 标准曲线的绘制：
   取6个带盖的1.5mL离心管，编好号后，按下表顺序加入试剂，按下表顺序加入试剂：
   

   管号	0	1	2	3	4	5
   0.25mg/mL的蛋白质标准工作液(μl)	0	40	80	120	160	200
   蒸馏水(μl)	200	160	120	80	40	0
   碱性铜试剂工作液(ml)	1	1	1	1	1	1
   每管加后立即混匀，置20～250C水浴保温10分钟
   1N Folin-酚试剂(μl)	100	100	100	100	100	100
   蛋白质含量(μg/μl)	0	0.05	0.10	0.15	0.20	0.25

   
   具体步骤：每管加入碱性铜试剂工作液后需立即混匀：，20～25℃放置10min后加入Folin-酚试剂，混匀后，20～25℃放置30min后在750nm下比色测定(1mL比色杯，1cm光径测定)。以蛋白含量(μg/μl)为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；
   
2. 稀释待测样品至合适浓度，使样品稀释液总体积为200μL，加入碱性铜试剂工作液1000μL，充分混匀，置20～25℃水浴保温10分钟后，加入1N Folin-酚试剂100μL，20～25℃放置30min后，以标准曲线0号管做参比，在750nm波长下比色，记录吸光值；
   
3. 根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白质含量(μg/μl)，乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度。